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实时荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。
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产品: 浏览次数:3155实时荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。 
品牌: biotree
型号: 常规
规格: 常规
单价: 面议
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有效期至: 长期有效
最后更新: 2014-10-09 11:51
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详细信息

实时荧光定量PCR( realtime fluores-cence quantitative PCR,RT-qPCR ),是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。由于荧光定量PCR具有高特异度、高灵敏度、高重复性,是科研、疾病诊断常用技术手段。
一、技术路线


二、技术方法
2.1 样本基因组提取
2.1.1RNA提取
  1. 所需样本量:细胞(≥106)、组织(≥300mg)、血液(≥2ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,总RNA(≥20μl,浓度≥ 50ng/μl)。
  2. 样本保存:组织样本请保存在-80ºC或保存在Trizol中(液氮研磨后)或保存在RNAlater中(动物组织)
  3. 样品运输:用冻存管保存,并用干冰或液氮运输。
相关技术服务
服务项目 内容说明
RNA提取  从血液、组织、叶片等样本材料中提取总RNA
血清RNA提取  从1-5ml血清中提取总RNA
石蜡包埋组织RNA提取  从石蜡包埋的组织块中提取总RNA
2.1.2DNA提取
  1. 所需样本量:细胞(≥106)、组织(≥300mg)、血液(≥2ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,总DNA(≥20μl,浓度≥ 50ng/μl);
  2. 样本保存:组织样本请保存在-80ºC;
  3. 样品运输:用冻存管保存,并用干冰或液氮运输。
相关技术服务
服务项目 内容说明
DNA提取  从血液、组织、叶片等样本材料中提取总DNA
血清DNA提取  从1-5ml血清中提取总DNA
石蜡包埋组织DNA提取  从石蜡包埋的组织块中提取总DNA
2.1.2样本质量检测
如果客户给的样本是已提取好的总RNA样本,需满足以下条件:
  1. 完整性:1.2%琼脂糖凝胶电泳出现两条带(28s、18s RNA),其中28s RNA条带的亮度是18s RNA条带亮度的1.5~2.0倍,否则说明RNA出现了降解。如果出现弥散片状或者条带缺失,则说明RNA样本出现严重降解,说明样本不可用;
  2. 纯度OD260/OD280在1.8~2.1之间,比值最好为2.0(保存液为pH=7.0 的RNase free ddH2O)。DNA 应该去除干净;
  3. 浓度:最低浓度不低于200ng/μl,每个样品总量不少于10μg;
  4. 保存条件:要溶解在H20或TE (pH 8.0),用冻存管保存,并用干冰或液氮运输;。
注:建议在条件允许情况下,提供可供两次样品制备的量,以确保实验质量及延续性。
2.1.3原则性要求
 (1)请提供新鲜材料,总量越多越好;
 (2)请提供已知的全长基因序列;
 (3)请提供尽可能详细的背景资料,如DNA/RNA来源等。
2.2反转录
   mRNA的cDNA第一链合成方法:
  1. 普通RNA模板
  2. 二级结构复杂的RNA模板(由我公司技术工程师鉴定)
2.3 荧光定量检测
  1. SYBR Green I法
  2. Taqman探针法
2.4 实验结果分析
  1. 相对定量
  2. 绝对定量
  3. 分析点突变和等位基因
  4. DNA甲基化检测
  5. 单核苷酸多态性(SNP)分析

三、实时荧光定量平台及参考报价
 

实时荧光定量平台 服务内容 价格
样本抽提 抽提RNA 70元/样
抽提DNA 50元/样
引物、Taqman探针设计及合成 引物设计及合成 100元/基因
Taqman探针设计及合成 1000元/基因
逆转录 RNA反转录成cDNA 50元/样
预实验(荧光定量体系优化) 确定荧光定量PCR最优条件 300元/基因
标准品制作 绝对定量分析必须制备 500元/基因
荧光定量检测 目的基因、内参基因 50元/反应
实验数据分析 分析实验数据,得出结论 免费

四、完成时间
2个星期,(视样本量大小而定)

所有版权及解释权归BIOTREE公司所有!
 
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