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microRNAs(miRNAs)是一种内源性非编码RNA,它的产生和成熟需要一系列因子的参与。
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产品: 浏览次数:1847microRNAs(miRNAs)是一种内源性非编码RNA,它的产生和成熟需要一系列因子的参与。 
品牌: biotree
型号: 常规
规格: 常规
单价: 面议
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有效期至: 长期有效
最后更新: 2014-10-09 11:51
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详细信息

microRNAs(miRNAs)是一种内源性非编码RNA,它的产生和成熟需要一系列因子的参与。最早从基因中转录出的是miRNA转录本(pri-miRNAs),被RNase III剪接加工生成70至100个核苷酸的发夹前体(Pre-miRNAs),然后从细胞核转移到细胞质中,Pre-miRNAs被另一个类似于RNase III的Dicer酶加工,生成长度平均为21-23nt的成熟miRNAs。 作为生命活动重要的调控因子,microRNAs(miRNAs)在基因表达调控、生物个体发育、代谢及疾病的发生等生理过程中起着重要的作用。

一、技术路线


二、技术方法


2.1 样本miRNA提取
所需样本量:细胞(≥106)、组织(≥300mg)、血液(≥2ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,总RNA(≥20μl,浓度≥ 50ng/μl);
样本保存:组织样本请保存在-80ºC或保存在Trizol中(液氮研磨后)或保存在RNAlater中(动物组织);
样品运输:用冻存管保存,并用干冰或液氮运输。
 
相关技术服务
服务项目 内容说明
RNA提取  从血液、组织、叶片等样本材料中提取总RNA
血清RNA提取  从1-5ml血清中提取总RNA
石蜡包埋组织RNA提取  从石蜡包埋的组织块中提取总RNA
miRNA提取 从细胞、血液、组织、叶片等多种样本材料中(石蜡包埋组织样本除外)提取是small RNA(<200nt),miRNA纯度、丰度更高。
2.2 样本质量检测
如果客户给的样本是已提取好的总RNA,需满足以下条件:
  1. 完整性:1.2%琼脂糖凝胶电泳出现两条带(28s、18s RNA),其中28s RNA条带的亮度是18s RNA条带亮度的1.5~2.0倍,否则说明RNA出现了降解。如果出现弥散片状或者条带缺失,则说明RNA样本出现严重降解,说明样本不可用;
  2. 纯度:OD260/OD280在1.8~2.1之间,比值最好为2.0(保存液为pH=7.0 的RNase free ddH2O)。DNA 应该去除干净;
  3. 浓度:最低浓度不低于200ng/μl,每个样品总量不少于10μg;
  4. 保存条件:要溶解在H20或TE (pH 8.0),用冻存管保存,并用干冰或液氮运输;。
注:建议在条件允许情况下,提供可供两次样品制备的量,以确保实验质量及延续性。
2.3反转录
   miRNA的cDNA第一链合成有两种方法:
  1. 加尾法
  2. 茎环法
2.4 荧光定量检测
  1. SYBR Green I法
  2. Taqman探针法
三、实时荧光定量平台及参考报价
实时荧光定量平台 服务内容 价格
miRNA提取 细胞、血清、组织等一般样本 100元/样
石蜡包埋组织样本 150元/样
高纯度富集miRNA提取 300元/样
miRNA 反转录 加尾法 1000元/样
茎环法 2000元/基因
特异性引物设计及合成 特异性引物设计及合成 500元/基因
荧光定量PCR 50微升体系 50元/反应
实验数据分析   免费

四、完成时间
2周,(视样本量大小而定)
所有版权及解释权归BIOTREE公司所有!
 
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